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指一類利用動(dòng)、植物或微生物體包括其提取物制成的培養(yǎng)基。如牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基、麥芽汁培養(yǎng)基等。

組合培養(yǎng)基

又稱為合成培養(yǎng)基或綜合培養(yǎng)基,是一類按微生物的營(yíng)養(yǎng)要求精確設(shè)計(jì)后用多種高純化學(xué)試劑配制成的培養(yǎng)基。如葡萄糖銨鹽培養(yǎng)基、淀粉硝酸鹽培養(yǎng)基等。

半組合培養(yǎng)基

指在液體培養(yǎng)基中加入少量凝固劑而配置成半固體狀態(tài)的培養(yǎng)基

液體培養(yǎng)基

80%～90%是水,其中配有可溶性的或不溶性的營(yíng)養(yǎng)成分的培養(yǎng)基。

固體培養(yǎng)基

一類配制成的固體狀態(tài)的基質(zhì)。根據(jù)性質(zhì)又分為固化培養(yǎng)基、非可逆性固化培養(yǎng)基、天然固態(tài)培養(yǎng)基、濾膜。

半固體培養(yǎng)基

指在液體培養(yǎng)基中加入少量的凝固劑而配制成的半固體狀態(tài)的培養(yǎng)基。

脫水培養(yǎng)基

又稱預(yù)制干燥培養(yǎng)基,指含有除水分外的一切成分的商品培養(yǎng)基。

微生物分類

選擇性培養(yǎng)基：一類根據(jù)某微生物的特殊營(yíng)養(yǎng)要求或其對(duì)某化學(xué)、物理因素的抗性而設(shè)計(jì)的培養(yǎng)基,具有使混合菌樣中的劣勢(shì)菌變成優(yōu)勢(shì)菌的功能,廣泛用于菌種篩選等領(lǐng)域。

鑒別培養(yǎng)基：一類在成分中加有能與目的菌的無(wú)色代謝產(chǎn)物發(fā)生顯色反應(yīng)的指示劑,從而達(dá)到只須用肉眼辨別顏色就能方便的從近似菌落中找出目的菌菌落的培養(yǎng)基。例如,伊紅美藍(lán)乳糖培養(yǎng)基（EMB）。

常見(jiàn)培養(yǎng)基

馬鈴薯培養(yǎng)基

英文名PDA,馬鈴薯去皮,切成塊加水,121°C滅菌煮沸30min（注意火力的控制,可適當(dāng)補(bǔ)水） ,用紗布過(guò)濾,濾液加糖,補(bǔ)足水至100ml,裝入三角瓶。

細(xì)菌培養(yǎng)基

牛肉膏瓊脂培養(yǎng)基

牛肉膏0.3g ,蛋白胨1.0g,氯化鈉0.5g,瓊脂 1.5g,水 100ml

在燒杯內(nèi)加水100毫升,放入牛肉膏、蛋白胨和氯化鈉,用蠟筆在燒杯外作上記號(hào)后,放在火上加熱。待燒杯內(nèi)各組分溶解后,加入瓊脂,不斷攪拌以免粘底。等瓊脂完全溶解后補(bǔ)足失水,用10%鹽酸或10%的氫氧化鈉調(diào)整pH值到7.2～7.6,分裝在各個(gè)試管里,加棉花塞,用高壓蒸汽滅菌：1.05千克每平方厘米、121攝氏度維持15~30分鐘。

牛心培養(yǎng)基

取新鮮牛心（除去脂肪和血管）250克,用刀細(xì)細(xì)剁成肉末后,加入500毫升蒸餾水和5克蛋白胨。在燒杯上做好記號(hào),煮沸,轉(zhuǎn)用文火燉2小時(shí)。過(guò)濾,濾出的肉末干燥處理,濾液pH值調(diào)到7.5左右。每支試管內(nèi)加入10毫升肉湯和少量碎末狀的干牛心,滅菌,備用。

根瘤菌培養(yǎng)基

葡萄糖10g 磷酸氫二鉀0.5g 碳酸鈣3g 硫酸鎂0.2g 酵母粉0.4g 瓊脂20g 水1000ml 1%結(jié)晶紫溶液1ml

先把瓊脂加水煮沸溶解,然后分別加入其他組分,攪拌使溶解后,分裝,滅菌,備用。

放線菌培養(yǎng)基

淀粉硝酸鹽培養(yǎng)基（高氏一號(hào)培養(yǎng)基）

可溶性淀粉 2.0g 硝酸鉀0.1g 磷酸氫二鉀0.05g 氯化鈉0.05g 硫酸鎂0.05g 硫酸亞鐵0.001g 瓊脂2g 水100ml

先把淀粉放在燒杯里,用5毫升水調(diào)成糊狀后,倒入95毫升水,攪勻后加入其他藥品,使它溶解。在燒杯外做好記號(hào),加熱到煮沸時(shí)加入瓊脂,不停攪拌,待瓊脂完全溶解后,補(bǔ)足失水。調(diào)整pH值到7.2～7.4,分裝后滅菌,備用。

面粉瓊脂培養(yǎng)基

面粉60g 瓊脂20g 水1000ml

把面粉用水調(diào)成糊狀,加水到500ml,放在文火上煮30分鐘。另取500ml水,放入瓊脂,加熱煮沸到溶解后,把兩液調(diào)勻,補(bǔ)充水分,調(diào)整pH值到7.4,分裝,滅菌,備用。

微藻培養(yǎng)基

1 BG-11培養(yǎng)基

NaNO3 1.5g K2HPO4 ·3H2O 0.04g MgSO4·7H2O 0.075g CaCl2 ·2H2O 0.036g Citric Acid （檸檬酸 ）0.006g Ferric ammonium citrate（檸檬酸鐵銨）0.006g EDTA (dinatrium-salt) 0.001g Na2CO3 0.02g A5 + Co solution * （A5溶液1000×）1ml Distilled Water （蒸餾水）919ml

2 SE培養(yǎng)基

Soil Extract(土壤提取液)配置方法

取花園土未施過(guò)肥0。5kg置于燒杯或三角瓶中，加入蒸餾水1000毫升，瓶口用透氣塞封口，在水浴中沸水加熱2小時(shí)，冷卻數(shù)小時(shí)，在無(wú)菌條件下過(guò)濾，取上清液，將滅菌蒸餾水加入上清液至總體積1000毫升。土壤提取液保存在4ºC備用。

Composition of the A5 solution

Add to 100 ml of distilled water:

A5溶液和EDTA-Fe溶液配制方法同上。

真菌培養(yǎng)基

薩市（Sabouraud’s）培養(yǎng)基

蛋白胨 10g 瓊脂20g 麥芽糖 40g 水1000ml

先把蛋白胨、瓊脂加水后,加熱,不斷攪拌,待瓊脂溶解后,加入40g麥芽糖（或葡萄糖）,攪拌,使它溶解,然后分裝,滅菌,備用。

本培養(yǎng)菌是培養(yǎng)許多種類真菌所常用的。

馬鈴薯糖瓊脂培養(yǎng)基

把馬鈴薯洗凈去皮,取200g切成小塊,加水1000ml,煮沸半小時(shí)后,補(bǔ)足水分。在濾液中加入10g瓊脂,煮沸溶解后加糖20g（用于培養(yǎng)霉菌的加入蔗糖,用于培養(yǎng)酵母菌的加入葡萄糖）,補(bǔ)足水分,分裝,滅菌,備用。

把這培養(yǎng)基的pH值調(diào)到7.2～7.4,配方中的糖,如用葡萄糖還可用來(lái)培養(yǎng)放線菌和芽孢桿菌。

豆芽汁培養(yǎng)基

黃豆芽100g 瓊脂15 g 葡萄糖20g 水1000ml

洗凈黃豆芽,加水煮沸30分鐘。用紗布過(guò)濾,濾液中加入瓊脂,加熱溶解后放入糖,攪拌使它溶解,補(bǔ)足水分到1000ml,分裝,滅菌,備用。

把這培養(yǎng)基的pH值調(diào)到7.2～7.4,可用來(lái)培養(yǎng)細(xì)菌和放線菌。

豌豆瓊脂培養(yǎng)基

豌豆 80粒瓊脂 5g 水200ml

取80粒干豌豆加水,煮沸1小時(shí),用紗布過(guò)濾后,在濾液中加入瓊脂,煮沸到溶解,分裝,滅菌,備用。

食用菌菌種培養(yǎng)基

馬鈴薯-蔗糖-瓊脂培養(yǎng)基

20%馬鈴薯煮汁 1000ml 蔗糖20g 瓊脂18g

把馬鈴薯洗凈去皮后,切成小塊。稱取馬鈴薯小塊200g,加水1000ml,煮沸20分鐘后,過(guò)濾。在濾汁中補(bǔ)足水分到1000ml,即成20%馬鈴薯煮汁。在馬鈴薯煮汁中加入瓊脂和蔗糖,煮沸,使它溶解后,補(bǔ)足水分,分裝,滅菌,備用。使用該培養(yǎng)基對(duì)pH值要求不嚴(yán)格,可以不測(cè)定。

綜合馬鈴薯培養(yǎng)基

20%馬鈴薯煮汁1000 ml 磷酸二氫鉀3g 硫酸鎂1.5g 葡萄糖20g 維生素10mg 瓊脂18g

先配制20%馬鈴薯煮汁,方法同上。在煮汁中加入上述各種組分,加熱溶解后補(bǔ)足水分,調(diào)整pH值到6。分裝,滅菌,備用。 該培養(yǎng)基用于培養(yǎng)和保存靈芝、平菇、香菇等食用菌菌種。

折疊煙草的培養(yǎng)基
在植物組織培養(yǎng)時(shí),通過(guò)調(diào)節(jié)IAA和CTK的比值能影響愈傷組織分化出根或芽。CTK/IAA高時(shí),愈傷組織分化芽

CTK/IAA低時(shí),分化根；CTK/IAA比例適中維持愈傷組織不分化

愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基制備

以MS培養(yǎng)基母液為基礎(chǔ),向潔凈鋁鍋中順序加入大量元素20×母液100mL,微量元素100×母液20mL,鐵鹽100×母液20mL ,維生素100×母液20mL,肌醇200×母液10mL,甘氨酸200×母液10mL,配制得MS培養(yǎng)基后,再加入0.5mg·L-1的BA8mL,0.5mg·L-1的NAA8mL.然后加入實(shí)際配制培養(yǎng)基體積約2/3-3/4的蒸餾水,加入40g蔗糖后攪拌使其溶化,用0.5mol·L-1的NaOH和0.5 mol·L-1的HCl調(diào)整pH值至5.8-6.0.加入14g瓊脂,將鋁鍋置于電爐上,攪拌加熱使瓊脂完全溶化,然后用蒸餾水定容至終體積2L,繼續(xù)加熱幾分鐘使之混合均勻后分裝于三角瓶中。

煙草葉片愈傷組織誘導(dǎo)取一無(wú)菌培養(yǎng)皿,用解剖刀切取1-2片無(wú)菌苗葉片置于無(wú)菌培養(yǎng)皿中,并用解剖刀將葉片切成2mm2左右的小片,然后將其接種于準(zhǔn)備好的培養(yǎng)基上,每瓶接種5小片,一共接種6瓶。接種后的三角平置于24條件下黑暗培養(yǎng)1周,然后在同樣溫度下有光照和全黑暗下培養(yǎng)3周直至愈傷組織形成(兩種情況各置3瓶).觀察愈傷組織誘導(dǎo)結(jié)果,統(tǒng)計(jì)愈傷組織誘導(dǎo)率。

器官分化及植株再生培養(yǎng)

將誘導(dǎo)的愈傷組織按類型分別轉(zhuǎn)入分化培養(yǎng)基上,置于連續(xù)光照,溫度20-22 C條件下培養(yǎng)3周,統(tǒng)計(jì)愈傷組織再生植株情況.

愈傷組織誘導(dǎo)的總體情況

煙草愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)4周后,愈傷組織基本形成,即排除因生長(zhǎng)時(shí)間不夠而未形成愈傷的情況。具體情況見(jiàn)表一中所示,6瓶培養(yǎng)物均有愈傷形成,且都未發(fā)生污染,但誘導(dǎo)率幾乎各不相同.其中, 在光照條件下培養(yǎng)的3瓶平均愈傷誘導(dǎo)率為60.0℅, 在黑暗條件下培養(yǎng)的3瓶平均愈傷誘導(dǎo)率為46.7%.由于實(shí)驗(yàn)過(guò)程中,外植體即煙草葉片取得偏小,接種時(shí)可能已有部分外植體的大部分細(xì)胞脫水死亡,使整個(gè)實(shí)驗(yàn)的愈傷組織誘導(dǎo)率偏低,愈傷塊偏小。

動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)基

RPMI1640培養(yǎng)基是一個(gè)全營(yíng)養(yǎng)型培養(yǎng)基,廣泛應(yīng)用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞和雜交瘤細(xì)胞的培養(yǎng),如人骨髓瘤細(xì)胞、鼠雜交瘤細(xì)胞、人白細(xì)胞以及B細(xì)胞和T細(xì)胞。最初設(shè)計(jì)用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)和人白血病細(xì)胞的單層細(xì)胞培養(yǎng)。

特殊培養(yǎng)基

選擇性培養(yǎng)基

選擇性培養(yǎng)基是指根據(jù)某種微生物的特殊營(yíng)養(yǎng)要求或其對(duì)某化學(xué)、物理因素的抗性而設(shè)計(jì)的培養(yǎng)基。其功能是使混合菌樣中的劣勢(shì)菌變成優(yōu)勢(shì)菌,從而提高該菌的篩選效率。

酵母菌富集培養(yǎng)基

葡萄糖5% 尿素0.1% 硫化銨0.1% 磷酸二氫鉀0.25% 磷酸氫二鈉0.05% 七水合硫酸鎂0.1% 七水合硫酸鐵0.01% 酵母膏0.05% 孟加拉紅0.003% pH4.5

Ashby無(wú)氮培養(yǎng)基

富集好氧自生固氮菌

甘露醇1% 磷酸二氫鉀0.02% 七水合硫酸鎂0.02% 氯化鈉0.02% 二水合硫酸鈣0.01% 碳酸鈣0.5%

EMB培養(yǎng)基　　

常用于鑒別E.coli

蛋白胨10g 乳糖5g 蔗糖5g 磷酸氫二鉀2g 伊紅Y 0.4g 美藍(lán)0.065g 蒸餾水1000g pH7.2

2216E培養(yǎng)基配方

分離海洋微生物的培養(yǎng)基配方

蛋白胨 5g 酵母膏1g 磷酸高鐵 0.01g 瓊脂15~20g 陳海水 1000ml 煮沸氫氧化鈉（5%）的溶液調(diào)PH值7.6~7.8

伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基

可用于檢測(cè)水中大腸桿菌的含量

首先按以下組成配制基礎(chǔ)培養(yǎng)基。

蛋白胨10g NaCl 5g

瓊脂15~20g

將上述物質(zhì)溶解后,用蒸餾水定容至1000mL,調(diào)節(jié)pH為7.6.滅菌后,冷卻至60℃左右,再按下面的比例,在無(wú)菌操作條件下加入滅菌的乳糖溶液、伊紅水溶液以及美藍(lán)水溶液。搖勻后,立即倒平板。溶液中的乳糖在高溫下會(huì)破壞,因此一般使用壓力為70kPa、溫度為115℃的條件滅菌20min.

基礎(chǔ)培養(yǎng)基 100mL 20%乳糖溶液2mL

2%伊紅水溶液 2mL 0.5%美藍(lán)水溶液1mL

天然細(xì)胞培養(yǎng)基

天然培養(yǎng)基是指來(lái)自動(dòng)物體液或利用組織分離提取的一類培養(yǎng)基,如血漿、血清、淋巴液、雞胚浸出液等。組織培養(yǎng)技術(shù)建立早期,體外培養(yǎng)細(xì)胞都是利用天然培養(yǎng)基。但是由于天然培養(yǎng)基制作過(guò)程復(fù)雜、批間差異大,因此逐漸為合成培養(yǎng)基所替代。目前廣泛使用的天然培養(yǎng)基是血清,另外各種組織提取液、促進(jìn)細(xì)胞貼壁的膠原類物質(zhì)在培養(yǎng)某些特殊細(xì)胞也是必不可少。

血清種類

目前用于組織培養(yǎng)的血清主要是牛血清,培養(yǎng)某些特殊細(xì)胞也用人血清、馬血清等。選擇用牛血清培養(yǎng)細(xì)胞的原因：來(lái)源充足、制備技術(shù)成熟、經(jīng)過(guò)長(zhǎng)時(shí)間的應(yīng)用考驗(yàn)人們對(duì)其有比較深入的理解。牛血清對(duì)絕大多數(shù)哺乳動(dòng)物細(xì)胞都是適合的,但并不排除在培養(yǎng)某種細(xì)胞時(shí)使用其他動(dòng)物血清更合適。

牛血清是細(xì)胞培養(yǎng)中用量最大的天然培養(yǎng)基,含有豐富的細(xì)胞生長(zhǎng)必須的營(yíng)養(yǎng)成份,具有極為重要的功能。牛血清分為小牛血清、新牛血清、胎牛血清。胎牛血清應(yīng)取自剖腹產(chǎn)的胎牛；新牛血清取自出生24小時(shí)之內(nèi)的新生牛；小牛血清取自出生10－30天的小牛。顯然,胎牛血清是品質(zhì)最高的,因?yàn)樘ヅ＿�未接觸外界,血清中所含的抗體、補(bǔ)體等對(duì)細(xì)胞有害的成分最少。

血清的主要成分

血清是由血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復(fù)雜的混合物,其組成成份雖大部分已知,但還有一部分尚不清楚,且血清組成及含量常隨供血?jiǎng)游锏男詣e、年齡、生理?xiàng)l件和營(yíng)養(yǎng)條件不同而異。血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長(zhǎng)因子、激素、無(wú)機(jī)物等,這些物質(zhì)對(duì)促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)或抑制生長(zhǎng)活性是達(dá)到生理平衡的。

血清主要作用

1、提供基本營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)：氨基酸、維生素、無(wú)機(jī)物、脂類物質(zhì)、核酸衍生物等,是細(xì)胞生長(zhǎng)必須的物質(zhì)。

2、提供激素和各種生長(zhǎng)因子：胰島素、腎上腺皮質(zhì)激素（氫化可的松、地塞米松）、類固醇激素（雌二醇、睪酮、孕酮）等。生長(zhǎng)因子如成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子、表皮生長(zhǎng)因子、血小板生長(zhǎng)因子等。

3、提供結(jié)合蛋白：結(jié)合蛋白作用是攜帶重要地低分子量物質(zhì),如白蛋白攜帶維生素、脂肪、以及激素等,轉(zhuǎn)鐵蛋白攜帶鐵。結(jié)合蛋白在細(xì)胞代謝過(guò)程中起重要作用。

4、提供促接觸和伸展因子使細(xì)胞貼壁免受機(jī)械損傷。

5、對(duì)培養(yǎng)中的細(xì)胞起到某些保護(hù)作用：有一些細(xì)胞,如內(nèi)皮細(xì)胞、骨髓樣細(xì)胞可以釋放蛋白酶,血清中含有抗蛋白酶成分,起到中和作用。這種作用是偶然發(fā)現(xiàn)的,現(xiàn)在則有目的的使用血清來(lái)終止胰蛋白酶的消化作用。因?yàn)橐鹊鞍酌敢呀?jīng)被廣泛用于貼壁細(xì)胞的消化傳代。血清蛋白形成了血清的粘度,可以保護(hù)細(xì)胞免受機(jī)械損傷,特別是在懸浮培養(yǎng)攪拌時(shí),粘度起到重要作用。血清還含有一些微量元素和離子,他們?cè)诖�謝解毒中起重要作用,如SeO3,硒等。

血清培養(yǎng)基主要問(wèn)題

1、血清的成份可能有幾百種之多,目前對(duì)其準(zhǔn)確的成份、含量及其作用機(jī)制仍不清楚,尤其是對(duì)其中一些多肽類生長(zhǎng)因子、激素和脂類等尚未充分認(rèn)識(shí),這給研究工作帶來(lái)許多困難。

2、血清都是批量生產(chǎn),各批量之間差異很大,而且血清保存期至多一年,因此,要保證每批血清的相似性極為困難,從而使實(shí)驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)化和連續(xù)性受到限制。

3、對(duì)大多數(shù)細(xì)胞,在體內(nèi)狀態(tài),血清不是它們接觸的生理學(xué)液體,只是在損傷愈合以及血液凝固過(guò)程中才接觸血清,因此使用血清有可能改變某種細(xì)胞在體內(nèi)的正常狀態(tài),血清可能促進(jìn)某些細(xì)胞的生長(zhǎng)（成纖維細(xì)胞）同時(shí)抑制另一類細(xì)胞生長(zhǎng)（表皮細(xì)胞）。

4、血清含一些對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生毒性的物質(zhì),如多胺氧化酶,能與來(lái)自高度繁殖細(xì)胞的多胺反應(yīng)（如精胺、亞精胺）形成有細(xì)胞毒性作用的聚精胺。補(bǔ)體、抗體、細(xì)菌毒素等都會(huì)影響細(xì)胞生長(zhǎng),甚至造成細(xì)胞死亡。

5、動(dòng)物個(gè)體不同,血清產(chǎn)地、批號(hào)不同,每批質(zhì)量差異甚大,其成分不能保持一致。

6、 取材中可能帶入支原體、病毒,對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生潛在影響,可能導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗或?qū)嶒?yàn)結(jié)果不可靠性。

7、大規(guī)模生產(chǎn)中,血清來(lái)源越來(lái)越困難,價(jià)格昂貴,是構(gòu)成動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)對(duì)生產(chǎn)成本的主要部分之一。

血清的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

血清質(zhì)量高低取決于兩方面因素：一是取材對(duì)象,二是取材過(guò)程。用于取材的動(dòng)物應(yīng)健康無(wú)病并且在指定的出生天數(shù)之內(nèi),取材過(guò)程應(yīng)嚴(yán)格按照操作規(guī)程執(zhí)行,制備出的血清要經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的質(zhì)量鑒定。WHO公布的《用動(dòng)物細(xì)胞體外培養(yǎng)生產(chǎn)生物制品規(guī)程》中的要求：

1、牛血清必須來(lái)自有文件證明無(wú)牛海綿狀腦病的牛群或國(guó)家。并應(yīng)具備適當(dāng)?shù)?a href="/baike/list_9332.html">監(jiān)測(cè)系統(tǒng)。

2、有些國(guó)家還要求牛血清來(lái)自未用過(guò)反芻動(dòng)物蛋白飼料的牛群。

3、證明所用牛血清中不含對(duì)所生產(chǎn)疫苗病毒的抑制物。

4、血清要通過(guò)濾膜過(guò)濾除菌,保證無(wú)菌。

5、無(wú)細(xì)菌、霉菌、支原體和病毒的污染,有些國(guó)家要求無(wú)細(xì)菌噬菌體污染。

6、對(duì)細(xì)胞有良好的支持繁殖作用。

我國(guó)在對(duì)牛血清的質(zhì)量2000年版《中國(guó)生物制品主要原輔料質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)》中提出比較嚴(yán)格的標(biāo)準(zhǔn)要求。包括蛋白質(zhì)含量,細(xì)菌、真菌、支原體、牛病毒、大腸桿菌噬菌體、細(xì)菌內(nèi)毒素,支持細(xì)胞增殖檢查。

外周血培養(yǎng)基配制

一、配制用水

培養(yǎng)基的大部分是水,所以水的質(zhì)量直接影響培養(yǎng)基的質(zhì)量。按Waymouth標(biāo)準(zhǔn),水的電阻應(yīng)為200萬(wàn)歐姆,一般實(shí)驗(yàn)室里以玻璃蒸餾器制備的

雙蒸水或三蒸水可以符合使用條件。

二、培養(yǎng)基

培養(yǎng)基有天然、人工兩種。一般實(shí)驗(yàn)室使用的是RPMI-1640粉末培養(yǎng)基,以雙蒸或三蒸水配制。NaHCO3（或HCl）調(diào)pH至7.2～7.4,若pH值超

過(guò)7.6或遠(yuǎn)低于6.8,則大多數(shù)細(xì)胞不能生長(zhǎng)。RPMI-1640不耐高壓滅菌,使用前需經(jīng)滅菌0.22μm孔徑濾膜濾過(guò)處理。

三、血清

培養(yǎng)中常使用小牛血清（或胎牛血清）。血清亦不能高壓滅菌,無(wú)菌的小牛血清需在56℃水浴30分鐘滅活補(bǔ)體,置4℃冰箱存放待用。配制時(shí)含

量視培養(yǎng)細(xì)胞種類、時(shí)間而定,一般用10—15%。由于血清成分復(fù)雜、條件不易控制,可選用無(wú)血清培養(yǎng)基。

四、抗菌素

為防止培養(yǎng)時(shí)期細(xì)菌的污染,可在培養(yǎng)基中添加適當(dāng)抗菌素,一般用量與組織細(xì)胞培養(yǎng)相同：卡那霉素100單位/毫升,或雙抗——青霉素100單位/

毫升,鏈霉素100微克/毫升。

五、植物血凝素（PHA）

非增殖期的細(xì)胞不能制備染色體,如人外周血淋巴細(xì)胞,但在離體培養(yǎng)過(guò)程中,在PHA的作用下,可被刺激轉(zhuǎn)化為淋巴母細(xì)胞而進(jìn)入有絲分裂。

經(jīng)實(shí)驗(yàn)測(cè)定其分裂高峰分別于培養(yǎng)后44—48小時(shí)和68—72小時(shí)。

PHA有粘多糖,蛋白質(zhì)兩種重要成分。粘多糖促使有絲分裂,蛋白質(zhì)起凝集作用。PHA激活的細(xì)胞數(shù)隨其濃度而增加,直至全部免疫活性細(xì)胞均

被激活為止,但PHA濃度過(guò)高會(huì)引起凝集,一般采用4%濃度為好。[1]

選擇培養(yǎng)基標(biāo)準(zhǔn)

選擇培養(yǎng)基沒(méi)有一定標(biāo)準(zhǔn),一般遵循以下幾點(diǎn)：

1、建立某種細(xì)胞株所用的培養(yǎng)基應(yīng)該是培養(yǎng)這種細(xì)胞首選的培養(yǎng)基;

2、可以查閱文獻(xiàn)或在購(gòu)買(mǎi)細(xì)胞株時(shí)咨詢;

3、平常慣用的培養(yǎng)基;

4、許多培養(yǎng)基可以適合多種細(xì)胞,根據(jù)細(xì)胞株的特點(diǎn)、實(shí)驗(yàn)的需要來(lái)選擇培養(yǎng)基;

5、用多種培養(yǎng)基培養(yǎng)目的細(xì)胞,觀察其生長(zhǎng)狀態(tài),可以用生長(zhǎng)曲線、集落形成率等指標(biāo)判斷;

6、根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果選擇最佳培養(yǎng)基,這是最客觀的方法,但比較繁瑣。